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酶標板的選購及拆裝酶標板有哪些注意事項
BUNSEN教您如何選購酶標板有哪些注意事項:
在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類(lèi)、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時(shí)間等條件起著(zhù)關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著(zhù)重要作用。
BUNSEN酶標板一般要比細胞培養板貴,細胞板主要做細胞培養,也可以用來(lái)測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板,一般不用做細胞培養,它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測,需要更高的要求和特定的酶標工作液。
一:根據酶標板底部的不同,可以分為平底、U型底、V型底
平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標儀上,直接通過(guò)目測觀(guān)察顏色變化情況,從而判定有無(wú)相應的免疫反應。V底的酶標板可以精確的吸取樣品。
二:根據酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,分為高結合力、中結合力和氨基化
高結合力:表面經(jīng)處理后,其蛋白結合能力大大增強,可達300~400ngIgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類(lèi)酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
中結合力:經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類(lèi)酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類(lèi)板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
氨基化:經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類(lèi)酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過(guò)離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類(lèi)板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無(wú)法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。
三:根據顏色分為透明、黑色、白色
透明的是常用的,用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會(huì )有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強的光,如熒光檢測。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來(lái)的問(wèn)題。有些客戶(hù)會(huì )問(wèn),用一般的酶標板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測,回答是不可以的,因為一般從化學(xué)發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說(shuō)各個(gè)方向上同等發(fā)射出來(lái)的。如果用透明的板子,光不僅會(huì )從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來(lái)。很容易的就會(huì )通過(guò)各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話(huà),光較強時(shí)相鄰孔之間的影響就會(huì )很大,因此不能用透明的酶標板來(lái)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗。
拆裝酶標板的注意事項:
酶標板在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類(lèi)、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時(shí)間等條件起著(zhù)關(guān)鍵作用。
抗原、抗體和其它生物分子通過(guò)多種機制吸附至載體表面,這包括通過(guò)疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過(guò)引入其它活性基團如氨基和碳基的共價(jià)結合,以及通過(guò)表面改性后的親水鍵結合。
BUNSEN酶標板的使用注意事項:
拍板動(dòng)作
當需要拍干板內的液體時(shí),建議垂直向下拍打,保證板內殘留液體甩干程度的一致性。
嚴禁斜角拍干,斜角拍打的過(guò)程中會(huì )導致上下板條受力不均,易出現板條脫落的情況,且也會(huì )導致液體甩干程度不一致而影響實(shí)驗結果分析。
拆裝動(dòng)作
當需要將板條拆下時(shí),可從板條正面兩端輕輕向上掰動(dòng),然后摳取下來(lái),務(wù)必要戴好無(wú)塵手套,以免污染板條而影響板條的透光性。
不可從板條的一端強行掰取,容易造成板條斷裂。
在裝板條時(shí),要注意方向,板條兩端分別設計成方形和半圓形,半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內(箭頭所在處),切勿裝反。
將板條裝入板框后,在兩側和中間部位都需要進(jìn)行按壓,壓實(shí)后方可進(jìn)行后續實(shí)驗。
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