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　　細胞培養小知識，你知道嗎?

　　什么是細胞培養呢?

　　細胞培養是指從動(dòng)物或植物中取出細胞，然后使其在合適的人工條件下生長(cháng)。這些細胞可于培養前直接從組織中取出來(lái)并采用酶或機械方法進(jìn)行解離，或者也可來(lái)自已經(jīng)建立的細胞系或細胞株。

　　接下來(lái)我們一起跟隨BUNSEN本生了解一些細胞培養中的小技巧：

　　1、冷凍管該如何解凍? 取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。

　　2、細胞冷凍管解凍培養時(shí)，是否應馬上去除DMSO? 除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基的培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無(wú)法生長(cháng)或貼附的問(wèn)題。

　　3、可否使用與原先培養條件不同的培養基? 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基， 細胞大都無(wú)法立即適應，造成細胞無(wú)法存活。

　　4、可否使用與原先培養條件不同的血清種類(lèi)? 不能。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。

　　5、何謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，FCS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS(calf serum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。

　　6、培養細胞時(shí)應使用5%或10%CO2?或根本沒(méi)有影響? 一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統，而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時(shí)應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細胞培養時(shí)應使用10%CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應使用5%CO2培養細胞。

　　7、何時(shí)須更換培養基? 視細胞生長(cháng)密度而定，或遵照細胞株基本數據上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養基即可。

　　8、培養基中是否須添加抗生素? 除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態(tài)下，培養基中不應添加任何抗生素。

　　9、附著(zhù)性細胞繼代時(shí)所使用的trypsin-EDTA濃度?應如何處理? 一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于-20°C，避免反復冷凍解凍造成trypsin 的活性降低，并可減少污染的機會(huì )。

　　10、懸浮性細胞應如何繼代處理? 一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時(shí)，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

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