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ELISA試劑盒實(shí)驗前如何做好優(yōu)化?
ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化:
1、包被液的挑選:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假定包被的抗原在堿性條件下不穩定的話(huà),也能夠運用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2、包被濃度的挑選:包被的最適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改動(dòng),一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清楚關(guān)于特定包被抗原的最適包被濃度需求通過(guò)實(shí)驗來(lái)斷定。
3、包被溫度的挑選:一般是4-8度條件下放置一個(gè)黑夜或許37度保溫2小時(shí),咱們激烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅持。
4、包被抗原的挑選:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類(lèi)。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,一般難于直接吸附在酶標板上,一般都先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì),比如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。
ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化:
在這一進(jìn)程中,一般狀況下有三次加樣,它們分別是加標本,加酶物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應充沛混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上激烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只需待血清天然凝結、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標本,然后在微型顫動(dòng)器上顫動(dòng)1分鐘以確?;旌?。一般說(shuō)來(lái),在5天內測定的血清標本可放置于4℃,逾越一星期測定的需低溫冰存。
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