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本生解析:ELISA試劑盒加液過(guò)程中需要注意問(wèn)題?
更新時(shí)間:2023-05-23瀏覽:467次

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  ELISA試劑盒加液過(guò)程中需要注意問(wèn)題?

  ELISA試劑盒在科研域應用廣泛,靈敏度高和特異性強的特點(diǎn)更是被。那我們在實(shí)驗中,如遇到試劑盒需要加液,那加液的過(guò)程中是不是也有我們應該注意的地方呢?

  在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。

  1、加樣時(shí)應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

  2、加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以混和。


試劑盒1.jpg


  3、加酶結合物應用液和底物應用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過(guò)程迅速完成。

  作為ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固后即可取得。除特殊情況外,在醫學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時(shí)會(huì )釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會(huì )增加非特異性顯色。

  ELISA試劑盒血清標本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性反應。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái),在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過(guò)一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過(guò)濾,澄清后再檢測。反復凍融會(huì )使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應注意無(wú)菌操作,也可加入適當防腐劑。

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