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本生提醒您:做ELISA標準曲線(xiàn)時(shí)需要注意哪些問(wèn)題
做ELISA實(shí)驗的老師們都知道ELISA標準曲線(xiàn)做的好與壞會(huì )直接影響到實(shí)驗的結果,甚至是關(guān)系到實(shí)驗的成敗。今天小編就和大家一起來(lái)看下我們在做ELISA標準曲線(xiàn)時(shí)需要重點(diǎn)注意的細節問(wèn)題。
設置標準曲線(xiàn)樣品的標準濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線(xiàn)濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線(xiàn),盡量要使實(shí)驗樣品的濃度在中間坡度*陡段,即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內。
2.檢測標準樣品時(shí),應按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
3.標準曲線(xiàn)的樣品數一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
4.做出的標準曲線(xiàn)相關(guān)系數因實(shí)驗要求不同而有所變動(dòng),但一般來(lái)說(shuō),相關(guān)系數R至少要大于0.98,對于有些實(shí)驗,至少要0.99甚至是0.999。
5.樣品的濃度等指標是根據標準曲線(xiàn)計算出來(lái)的,所以首先要把做標準曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗結果無(wú)從談起。
6.采用倍比稀釋法配制標準曲線(xiàn)中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會(huì )出現較大的偏離。
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