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ELISA實(shí)驗操作要點(diǎn)
每個(gè)實(shí)驗都有自己的規則以及注意點(diǎn),elisa實(shí)驗也不例外,對于elisa實(shí)驗如此條件嚴格的,那么如何才能保障elisa實(shí)驗的正常進(jìn)行呢,下面本生生物操作人員的技術(shù)要求,的確是如此,下面就是elisa實(shí)驗時(shí)索要注意的問(wèn)題。
ELISA實(shí)驗操作18條要點(diǎn):
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過(guò)2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但hao有專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時(shí)。
3、要在實(shí)驗前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、實(shí)驗時(shí),要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時(shí),避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì )自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
9、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時(shí),每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒(méi)有洗板機時(shí),倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(cháng)期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現配。
13、檢測前,要打開(kāi)酶標儀,使之穩定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會(huì )影響結果。
16、溫浴時(shí)間應遵守試劑盒規定。
17、應盡量做雙孔實(shí)驗,這樣才能保證數據的準確性。
18、對結果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
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