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　   本生知識分享—ELISA試劑盒檢測注意事項匯總

　　以下是本生技術(shù)小編總結：影響ELISA檢測的關(guān)鍵因素，也是眾多ELISA 用戶(hù)在實(shí)驗中經(jīng)常遇到的問(wèn)題及解決方案：

　　Q1：為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進(jìn)行加樣操作?

　　A1：溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應，實(shí)驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。

　　Q2：為什么標準曲線(xiàn)線(xiàn)性較差?

　　A2：按照推薦方式保存標準品;溶解標準品之前需短暫離心，收集粉末;確保標準品溶解和混勻(大約10min)，然后再進(jìn)行后續的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且精確移液;顯色的恰當終止;選擇合適的數學(xué)擬合方程繪制標準曲線(xiàn)。

　　Q3：ELISA實(shí)驗為什么必須設置復孔?

　　A3：為獲得更準確的實(shí)驗結果，強烈建議標準品及樣本進(jìn)行復孔檢測。

　　因為復孔檢測可以：

　　★計算平均值，確保實(shí)驗結果更準確;

　　★解決實(shí)驗中誤操作造成的跳孔現象;

　　★計算CV值，對實(shí)驗的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評估。

　　Q4：為什么實(shí)驗過(guò)程中孵育、洗滌需要振蕩?如何振蕩?

　　A4：振蕩孵育使反應更充分，振蕩洗滌使背景更干凈。建議使用酶標專(zhuān)用96孔微孔板振蕩器。

　　孵育過(guò)程振蕩，可以加快、加強抗原抗體間的相互碰撞接觸，使得反應過(guò)程更加，OD值通常會(huì )比未振蕩孵育的結果要高;洗滌過(guò)程振蕩，可以使洗板更干凈，在很大程度上能降低背景值，同時(shí)可以提高試劑盒檢測的靈敏度。

　　具體操作請參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)或致電勁馬生物

　　Q5：何時(shí)終止ELISA反應?

　　A5：ELISA實(shí)驗最終需要酶催化底物顯色反應來(lái)完成，在最合適的時(shí)間終止反應是ELISA實(shí)驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶反應系統中，當最高濃度標準品顏色不再變深，倒數2-3個(gè)濃度標準品顏色開(kāi)始有淺藍色時(shí)，便需要終止反應;或者也可以根據最高濃度標準品孔在620nm的OD值來(lái)決定，OD620=0.9-0.95之間時(shí)即可終止。

　　Q6：為什么酶標儀讀數時(shí)必須選用雙波長(cháng)?

　　A6：首先，酶標儀使用前務(wù)必預熱10-15min，使測讀結果更穩定。其次，ELISA實(shí)驗采用雙波長(cháng)測定吸光度，可以排除單波長(cháng)檢測時(shí)的測定干擾(標本的濃度，干擾色等)。一般采用最大波長(cháng)作為參照波長(cháng)，在參照波長(cháng)下，檢測物的吸光值最小，檢測波長(cháng)和參照波長(cháng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收;因此，雙波長(cháng)測定，可最大限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對酶標儀讀數帶來(lái)的誤差，以保證實(shí)驗數據的準確度。

　　本生ELISA檢測 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。