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你知道NC膜和PVDF膜該怎么選么?
更新時(shí)間:2023-03-08瀏覽:1453次

  你知道NC膜和PVDF膜該怎么選么?

 

  1、硝酸纖維素膜

  硝酸纖維素膜(NC膜)是蛋白印跡實(shí)驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環(huán)境下,大多數帶負電荷的蛋白質(zhì)會(huì )與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結合在一起,雖然這其中的機制還不是十分清楚,但由于硝酸纖維素膜(NC膜)的這個(gè)特性,而且易于封閉非特異性結合,從而得到了廣泛的應用。

  在非離子型的去污劑作用下,結合的蛋白還可以被洗脫下來(lái)。根據被轉移的蛋白分子量大小,要選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜(NC膜)。

  因為隨著(zhù)膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm,蛋白的轉移就很難進(jìn)行了。

  從膜的質(zhì)地上來(lái)看,最重要的指標就是單位面積上能夠結合的蛋白的量。硝酸纖維素膜(NC膜)的結合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關(guān),市場(chǎng)上有些硝酸纖維素膜(NC膜)通常會(huì )還有大量的醋酸纖維素,因而降低了蛋白的結合量。如果采用的是*純度的硝酸纖維素, 保證了最大的蛋白結合量,可達80-150μg/cm2。

  由于*的純度,因而也大大減少了非特異性的結合,降低雜交背景,無(wú)需高嚴謹度的洗脫步驟。其次,膜的強度和韌性也是需要考慮的因素。常規的硝酸纖維素膜比較脆,漂洗一兩次就會(huì )破損,不能反復使用。

  2、PVDF轉移膜

  PVDF膜即聚偏二氟乙xi膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF本質(zhì)是一種疏水性的聚合物,在水溶液中不會(huì )浸濕,為了在水性緩沖液和系統中使用PVDF膜,首先必須將其浸泡在50%(v/v)或更高濃度的醇溶液中。

  (PVDF膜在使用時(shí)需預處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負電的蛋白結合。)甲醇、乙醇和異丙醇都適合浸泡這種膜。隨著(zhù)膜的外觀(guān)從不透明到半透明,*浸濕是顯而易見(jiàn)的。之后必須用水反復沖洗以去除醇類(lèi),經(jīng)預處理的膜可以直接放入轉印緩沖液中平衡。

  一旦膜被浸濕,蛋白結合可通過(guò)蛋白與膜的接觸而實(shí)現。由于蛋白與膜的結合貫穿整個(gè)膜的厚度(深度),結合能力是由孔的內部表面積來(lái)決定的,隨著(zhù)膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。

  0.2um PVDF膜內部表面積大約是0.45um PVDF 膜的三倍,使其吸附能力更高。PVDF膜是疏水性的,一般大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜。

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