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一、實(shí)驗目的

1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。

2. 掌握移液槍和 PCR 儀的基本操作技術(shù)。

二、實(shí)驗原理

PCR 技術(shù)，即聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國 PE Cetus 公司的 Kary Mullis 在 1983 年（1993 年獲諾貝爾化學(xué)獎）建立的。這項技術(shù)可在試管內的經(jīng)數小時(shí)反應就將特定的 DNA 片段擴增數百萬(wàn)倍，這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有舉足輕重的意義，極大地推動(dòng)了生命科學(xué)的研究進(jìn)展。它不僅是 DNA 分析常用的技術(shù)，而且在 DNA 重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價(jià)值。

PCR 可以被認為是與發(fā)生在細胞內的 DNA 復制過(guò)程相似的技術(shù)，其結果都是以原來(lái)的 DNA 為模板產(chǎn)生新的互補 DNA 片段。細胞中 DNA 的復制是一個(gè)非常復雜的過(guò)程。參與復制的有多種因素。PCR 是在試管中進(jìn)行的 DNA 復制反應，基本原理與細胞內 DNA 復制相似，但反應體系相對較簡(jiǎn)單。

PCR 由變性 -- 退火 -- 延伸三個(gè)基本反應步驟構成：①模板 DNA 的變性：模板 DNA 經(jīng)加熱至 94℃左右一定時(shí)間后，使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR 擴增形成的雙鏈 DNA 解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應做準備；

②模板 DNA 與引物的退火 (復性)：模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃左右，引物與模板 DNA 單鏈的互補序列配對結合；

③引物的延伸：DNA 模板 -- 引物結合物在 Taq 酶的作用下，以 dNTP 為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板 DNA 鏈互補的半保留復制鏈。

重復循環(huán)變性 -- 退火 -- 延伸三過(guò)程，就可獲得更多的 “半保留復制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 2～4 分鐘， 2～3 小時(shí)就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬(wàn)倍。

三、實(shí)驗試劑與器材

模板 DNA、2.5mmol/L dNTP

Taq DNA 聚合酶（5U/μL）、SSR 引物

10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2O

PCR 儀、移液槍、PCR 板

四、實(shí)驗步驟

1、配制 20μL 反應體系，在 PCR 板中依次加入下列溶液：

模板 DNA 2μL

引物 1 1μL

引物 2 1μL

dNTP 1.5μL

MgCl2 2μL

10×buffer 2μL

ddH2O 10μL

Taq 酶 0.5

2、設置 PCR 反應程序。

3、上樣，啟動(dòng)反應程序。

4、擴增產(chǎn)物的電泳檢測。

產(chǎn)品優(yōu)勢：
本生生物代理實(shí)驗室耗材,PCR 耗材品種全，可替代儀器原廠(chǎng)耗材，性?xún)r(jià)比高，質(zhì)量穩定，對用戶(hù)可以節省實(shí)驗成本。

適應客戶(hù)：
醫院檢驗科 PCR 實(shí)驗室，中心實(shí)驗室，肝病中心；第三方檢測機構，科研院所，大專(zhuān)院校，制藥廠(chǎng)，試劑生產(chǎn)廠(chǎng)家，疾控中心，檢驗檢疫。