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　　細胞培養基的操作過(guò)程您了解嗎?

　　細胞培養基是人工模擬細胞在體內成長(cháng)的養分環(huán)境，是供應細胞養分和促進(jìn)細胞成長(cháng)增殖的物質(zhì)基礎。培育液或培育基的含義簡(jiǎn)直相同，英文都是medium。當它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培育基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培育液。培育液中常常補加血清、抗生素等成分。

　　過(guò)程：

　　一、復蘇

　　1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，當即投入37℃水浴鍋中，輕微搖晃。液體都融化后(大約1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

　　2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來(lái))，1000轉離心5分鐘。

　　3.把上清液倒掉，加1ml培育基把細胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃，使培育皿中的細胞均勻分布。

　　4.標好細胞品種和日期、培育人姓名等，放到CO2培育箱中培育，細胞貼壁后換培育基。

　　5.3天換一次培育基。

　　二、傳代

　　1.培育皿中的細胞覆蓋率到達80%-90%時(shí)要傳代。

　　2.把原有培育基吸掉。

　　3.加恰當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。

　　4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。

　　5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來(lái)。

　　6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。

　　7.倒掉上清液，加1-2ml培育基，把細胞都吹起來(lái)。

　　8.依據細胞品種把細胞傳到幾個(gè)培育皿中。一般，癌細胞分5個(gè)，正常細胞傳3個(gè)，繼續培育。

　　三、凍存

　　把細胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，中止幾分鐘，寫(xiě)明細胞品種，凍存日期4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。

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