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新生牛血清(Newborn Calf Serum)是來(lái)自剛出生~出生后2周內的新生牛靜脈取血。經(jīng)大規?;旌虾蟪^(guò)濾制成成品,主要用于動(dòng)物細胞培養,是醫藥生物技術(shù)產(chǎn)品的重要原材料之一,其質(zhì)量好壞直接影響細胞生長(cháng)情況。
總蛋白含量是新生牛血清需要檢查的指標。它屬于化學(xué)成分的初步分析。有人統計過(guò)國產(chǎn)新生牛血清的蛋白含量1,在比較各產(chǎn)區各年份后,發(fā)現其含量在3.7%~4.4%之間。進(jìn)口新生牛血清并不與之*一致。因為國內的血清常采自奶牛,而國外的血清常采自肉牛。蛋白質(zhì)是新生牛血清的主要成分,在細胞培養中起著(zhù)維持滲透壓、pH 值緩沖、物質(zhì)運輸和提供營(yíng)養、促進(jìn)細胞粘附等重要作用。在胎牛血清中,其總蛋白含量要更低。
血紅蛋白含量也是新生牛血清一項重要檢測指標。它是在血清運輸和加工過(guò)程中細胞裂解釋放到血清中的。之所以檢測主要是由于牛血清中血紅蛋白具有氧化性,其含量過(guò)高會(huì )引起羧基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過(guò)氧化反應,從而導致生產(chǎn)細胞受損,也會(huì )增加下游純化處理的難度,給藥品質(zhì)量帶來(lái)安全隱患2。有報道血紅蛋白具有神經(jīng)毒性。
使用時(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:
一、保存血清-好的方法?
血清應保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,建議將無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
二、如何解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。
三、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1.解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2.解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì )變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
5.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )造成沉淀物的增多。
四、血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會(huì )阻塞過(guò)濾膜。
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